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- 余星柏
扮演者： 黄宗泽
法证部高级化验师。醉心科学，希望利用科学知识发掘真相，彰显真相。星柏为高级化验师，与法医范佩清及重案组高级督察井浩然合作无间。星柏凡事追求完美，甚至吹毛求疪，令人感到难以相处，多年来都是单身贵族。
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- 井浩然
扮演者： 袁伟豪
重案组高级督察。儿时经历父母遇害，案件在没有目击者及线索下成为悬案，浩然自此立志成为警察，为父母查出真凶。因为童年经历，陷入长期失眠状态，浩然利用失眠时间併命工作，深受上司赏识。为解决失眠问题，浩然求助于网上失眠群组，认识群组内的谭倩雯。二人后来成为好友，更组成失眠乐队。
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- 范佩清
扮演者： 蔡洁
法医科高级医生。佩清从事法医工作，坚持毋枉毋纵的精神，以专业敏锐触觉为死者说话。性格乐观，是高傲的星柏及尖酸的浩然之间的调和剂，三人合作无间，互相砥砺。佩清被陌生男子秦克男找上，克男坚称坐了冤狱，要求佩清为他翻案。后来佩清成功替克男翻案，二人成为好友。
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- 谭倩雯
扮演者： 蔡思贝
斜槓族。倩雯过著多姿多彩的“斜槓族”生活模式，性格灵活变通，多才多艺，平时以自由工作性质兼任活动公关、电脑程式设计师、博客及打鼓导师。倩雯多年来受失眠所困，加入一个“失眠群组”，与其他同路人相互分享与倾诉。群组人士定期举办深宵聚会，浩然亦是其中一员，为倩雯的人生掀起波澜。
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- 秦克男
扮演者： 洪永城
流氓医生。医术精湛，对贫苦大众好施医德，广交好友，与黑道中人称兄道弟。早年含冤入狱，厌恶不平世道，据理力争，誓要为自己讨回公道。克男向佩清求助，佩清愿意帮忙，联同星柏、浩然成功翻案，让克男得到清白。克男洗脱冤情，但未有重投正统医生行列，反而选择做流氓医生。
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- 霍宝英
扮演者： 王敏奕
重案组探员。父亲从事殡仪行业多年，见尽不少凶杀案受害者的惨死状况，宝英耳濡目染下矢志要成为警员维护法纪。大学毕业后，宝英顺理成章投身警队。重案组和法证部合作无间，宝英见识到星柏鑑证才能，好感渐生。宝英向星柏告白，以失败告终，不过宝英对星柏的感情并未冷却，主动请缨帮星柏调查悬案。
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- 湛霆
扮演者： 郑俊弘
法证部科学鑑证主任。湛霆在法证部工作一段日子，一直视星柏为师父及偶像，以他为发奋目标，渴望得到星柏的认同。星柏也赏识湛霆，引荐湛霆升职，湛霆不欲辜负星柏的期望，做事更有干劲亦更仔细。湛霆与高级化验师张世熙调查女富豪劫杀案，湛霆从证据中发现疑凶。后来，浩然找到重要证据，对女富豪之死重新展开调查。
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- 张世熙
扮演者： 高钧贤
法证部高级化验师。待人友善，时常鼓励后辈，是同事倚靠的对象。与柏星同任高级化验师，在星柏休假时，暂代星柏职务。世熙知道星柏徒弟湛霆快要升职，主动让湛霆带队，世熙担任检验证物的工作，湛霆当案件主管，调查女富豪被杀案。后来浩然发现这单案件的新证据，重新调查。
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- 傅剑成
扮演者： 丁子朗
大学医科生。自少与母亲相依为命，母亲是标本师，所以剑成不害怕看到尸体。母亲意外过世，剑成努力唸书，考入大学读医。第一次为尸体解剖，剑成表现冷静，并发现大体老师并不是单纯地死于心脏衰竭，独到的触觉令客席教授佩清留下深刻印象。剑成留意到佩清自从遇过连环杀人犯后，精神日渐变差，剑成得悉佩清背后的秘密。
